Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:10 мин. • July 8th, 2025
Возьмите лунки, содержащие полиакриламидные гидрогели различной жесткости, покрытые коллагеном, имитирующие физиологический внеклеточный матрикс, или ЭКМ.
Добавьте микрососудистые эндотелиальные клетки, которые образуют фокальные спайки, или FA — комплексы, опосредующие связывание клетки с ECM, — чтобы почувствовать жесткость гидрогеля.
Более жесткие гидрогели повышают экспрессию виментина, компонента цитоскелета, на клеточной поверхности по сравнению с более мягкими гидрогелями.
Добавьте бактерии Listeria monocytogenes, сконструированные для экспрессии флуоресцентного белка под промотором белка, индуцирующего сборку актина, или ActA.
Центрифуга для синхронизации контакта бактерий с клетками-хозяевами и инкубация.
Бактерии связываются с виментином. Большее количество виментина на более жестких гидрогелевых клетках хозяина приводит к большей адгезии бактерий и эндоцитозу.
Добавьте антибиотик, устраняя неинтернализованные бактерии.
Интернализованные бактерии выделяют токсины, разрывая мембрану эндосома. Цитоплазматический побег активирует промотор ActA для экспрессии флуоресцентного белка, мечения внутриклеточных бактерий.
Ферментативно отделите клетки. С помощью проточной цитометрии
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео