Микроразведка бульона in vitro для скрининга противогрибковых соединений

Возьмите планшет для микротитров и добавьте в него последовательные разведения новых антимикробных пептидов или АМФ — исследуемых соединений.

Назначьте подмножество лунок в качестве ограничителей роста и добавьте стерильную воду без АМП.

Добавьте в выбранные лунки патогенный грибок, взвешенный в питательных средах.

Добавляйте только среды, свободные от грибка, в подмножество лунок, обозначенных как пустые контрольные лунки.

Закройте пластину и инкубируйте во влажных условиях, способствующих росту грибков.

После инкубации понаблюдайте за лунками под микроскопом.

Контроль роста выглядит мутным из-за роста грибка в отсутствие АМП. Помутнение по всем разведениям АМФ указывает на его неэффективность против грибка.

Пустые элементы управления, лишенные грибкового роста, кажутся четкими. Сравнивают тестовые лунки с холостыми контрольными для подтверждения отсутствия роста, свидетельствующего об антигрибковой активности АМП.

Самая низкая концентрация АМФ, которая подавляет рост грибков, называется минимальной ингибирующей концентрацией, или MIC.

Противогрибковый анализ проводится в трех экземплярах в 96-луночных полистирольных микропланшетах с использованием 2-кратного серийного разведения