Анализ использования АТФ для определения выживаемости бактерий при лечении антибиотиками

Начните с посева бактериальной культуры в планшет для анализа. Затем инкубируйте тарелку.

Бактериальные клетки имеют поверхностные адгезины и пили, которые позволяют им прилипать друг к другу, образуя небольшие агрегаты.

Добавьте в лунки антибиотики различной концентрации, оставив одну из них необработанной для контроля.

Молекулы антибиотика взаимодействуют с чувствительными бактериями, влияя на их способность расти и размножаться, что приводит к их гибели.

Устойчивые к антибиотикам бактерии остаются метаболически активными, продуцируя молекулы АТФ.

Используйте ультразвуковую терапию для разрушения бактериальных клеток, высвобождая их внутриклеточное содержимое, в том числе АТФ.

Добавьте АТФ-утилизационный реагент свечения, содержащий люциферин, фермент люциферазу и другие кофакторы.

Люцифераза использует АТФ и кислород для превращения люциферина в возбужденный оксилюциферин.

Впоследствии оксилюциферин переходит в основное состояние, излучая люминесцентный свет.

Измерьте поглощение с помощью считывателя пластин.

Снижение абсорбции при более высоких концентрациях антибиотиков предполагает более низкую продукцию АТФ, что указывает на снижение выживаемости бактерий.

Измерьте оптическу