Анализ для оценки иммунодоминирования в ответе цитотоксических Т-лимфоцитов

Начните с меченных флуоресцентными красителями клеток-мишеней, представляющих собой нереактивный пептидный эпитоп или эпитопы пептидов, полученных из опухолевого антигена, с различной иммуногенностью.

Эти клетки демонстрируют различную интенсивность флуоресценции — низкую, промежуточную и высокую — в соответствии с представлением нереактивных, субдоминантных и иммунодоминантных пептидных эпитопов соответственно.

Введите клеточную суспензию внутривенно сенсибилизированной мыши.

Введенные клетки перемещаются в селезенку, содержащую популяции иммунных клеток, включая цитотоксические Т-лимфоциты или CTL.

В селезенке CTL взаимодействуют с эпитопами клеток-мишеней.

Иммунодоминантные эпитопы, будучи более иммуногенными, вызывают устойчивый иммунный ответ CTL, высвобождая цитотоксические вещества и приводя к высокоинтенсивному флуоресцентному лизису клеток.

Соберите мышиную селезенку и механически разрушьте ее. Добавьте буфер для лизиса для устранения эритроцитов и отфильтруйте суспензию.

Центрифугируйте и повторно суспендируйте клеточную гранулу.

Отсортируйте клетки с помощью флуоресцентно-активируемого сортировщика клеток. Снижение количества высокоинтенсивных флуоресцентных клеток по ср