Анализ in vitro для оценки иммуномодулирующего влияния моноцитов на пролиферацию лейкоцитов

Возьмите многолуночный планшет с адгезивной культурой мезенхимальных стволовых клеток, или МСК.

Добавьте мононуклеарные клетки периферической крови, или PBMC, и инкубируйте.

МСК секретируют фактор роста гепатоцитов, побуждая моноциты приобретать иммуномодулирующий фенотип, продуцируя интерлейкин-10, или ИЛ-10.

Перенесите содержащую ПМК надосадочную жидкость в трубку.

Добавьте покрытые антителами магнитные шарики, связывающиеся с поверхностным маркером моноцитов CD14.

Используйте магнитный сепаратор для выделения моноцитов CD14+ и добавляйте их в лунки с несколькими лунками в возрастающих концентрациях.

Введите флуоресцентные эффекторные CD4+ Т-клетки, меченные CFSE.

Добавьте конъюгированные антителами микрогранулы, специфически связывающиеся с маркерами поверхности Т-клеток CD3 и CD28, активируя клетки.

В контрольной группе с хорошо отсутствующими моноцитами активируемые Т-клетки пролиферируют, при этом при каждом делении клетки снижается интенсивность флуоресценции CFSE в дочерних клетках.

Однако в кокультурах моноциты, индуцированные МСК, секретируют IL-10, подавляя пролиферацию эффекторных Т-клеток.

Используя проточную цитометрию, наблюдайте меньшее количество Т-клеток со снижен