Анализ адгезии твердой фазы для оценки образования биопленки

Возьмите многолуночный планшет с плоским дном и лунками, содержащими бактерии в питательных средах или бактерии в питательных средах с добавлением желчной соли.

Желчные соли вызывают стресс, вызывая повреждение клеток и высвобождая ДНК и белки. Эти биомолекулы покрывают дно скважин, позволяя выжившим бактериям прилипать к твердой поверхности.

Прикрепленные бактерии размножаются, образуя микроколонии и производя автоиндукторы — или химические сигнальные молекулы, обеспечивающие бактериальную коммуникацию.

Эта коммуникация заставляет бактерии колонизировать и инициировать производство внеклеточных полимерных веществ или EPS, создавая биопленку.

После инкубации удалите среду, чтобы устранить свободно плавающие бактерии.

Введите кристаллический фиолетовый краситель, который взаимодействует с пептидогликаном клеточной стенки бактерии, придавая ей фиолетовый цвет.

Удалите лишнее пятно и высушите. Обложите этанолом для растворения кристалла фиалки из клеточной стенки бактерии, изменяя цвет раствора.

Более интенсивная окраска в скважинах, обработанных желчными солями, чем в необработанных, подтверждает образование биопленки за счет адгезии к твердой фазе.

Сначала пометьте две 1,5-миллилитр