Анализ для изучения образования биопленки, индуцированного желчными солями, с помощью матричного детектирования ЭПС

Возьмите многолуночный планшет, содержащий патогенные кишечные бактерии в питательной среде.

Среда в выбранных лунках содержит желчные соли — или амфипатические молекулы с детергентоподобной активностью — имитирующие суровые условия роста.

Желчные соли разрушают бактериальную мембрану и вызывают повреждение ДНК и белков.

В качестве контрмеханизма бактерии образуют биопленку — структурированное бактериальное сообщество, заключенное в самостоятельно производимую матрицу внеклеточных полимерных веществ, или ЭПС, содержащую полисахариды, белки, липиды и нуклеиновые кислоты микробного происхождения.

Слой EPS защищает бактерии от воздействия желчных солей.

После инкубации аспирируйте среду, чтобы удалить свободно плавающие бактерии.

Обработайте фиксирующим буфером, чтобы сохранить архитектуру биопленки, и промойте, чтобы удалить излишки буфера.

Добавьте флуоресцентно меченный Concanavalin A — лектин, который связывается с полисахаридами EPS, маркируя биопленку. Умыться, чтобы удалить излишки Конканавалина А.

С помощью считывателя пластин измерьте флуоресценцию. Более высокая интенсивность флуоресценции в лунках, содержащих желчные соли, указывает на образование биопленки, вызванной желчн