Метод пробоподготовки для визуализации биопленкообразующих бактерий на гифах грибов

Введите связанную с целлофаном колонию грибов в флуоресцентно меченую бактериальную суспензию. Достаньте целлофан и инкубируйте.

Бактериальные клетки прикрепляются к поверхности гриба через поверхностные молекулы и рецепторы. Адгезивные бактерии выделяют внеклеточные полимерные вещества, состоящие из полисахаридов, белков и ДНК, захватывая бактериальные клетки и формируя структурную основу биопленки.

Промойте секцию в крепком солевом растворе, чтобы удалить слабо связанные бактерии

В фосфатном буфере разрежьте часть колонии.

Перенесите срез в стерильную воду, содержащую агглютинин зародышей пшеницы, или WGA, связанную с красным флуоресцентным красителем.

WGA, растительный белок, связывается с остатками N-ацетилглюкозамина и сиаловой кислоты, позволяя прикрепленному красителю флуоресцировать на клеточной стенке гриба.

Промойте срез в фосфатном буфере.

Частично погрузите предметное стекло в буфер. Пусть секция плавает на ней. Осторожно поднимите, чтобы секция осела без разрушения биопленки.

Установите монтажный материал, а затем покровное стекло для микроскопического анализа.

После выращивания бактерий в течение ночи центрифугируйте культуру при 5000 г в течение трех минут, а затем с