Анализ миграции резидентных Т-клеток в различных областях опухоли в режиме реального времени с помощью конфокальной микроскопии

Начните со среза опухоли легкого, содержащего резидентные Т-клетки.

Т-клетки мигрируют по опухолевому микроокружению и взаимодействуют с опухолевыми клетками и стромальными элементами, выполняя иммунные функции.

Состав опухолевого микроокружения сильно влияет на смещение и скорость вытеснения Т-клеток.

Добавляйте различные флуоресцентно связанные антитела для маркировки Т-клеток, опухолевых клеток и стромальных элементов в микроокружении.

Добавьте DAPI, который инфильтрирует клетки с поврежденной плазматической мембраной для окрашивания ядра, что позволяет визуализировать некротические участки внутри опухоли.

Рассмотрите окрашенный образец под конфокальным микроскопом.

Используя подходящий флуоресцентный свет, выберите интересующую область опухоли, содержащую резидентные Т-клетки. Оценивайте жизнеспособность клеток путем оценки DAPI-положительных клеток.

Для анализа в режиме реального времени определите временные интервалы и общее время записи.

Чтобы захватить изображения с z-стеком, начните с глубины ниже помеченных Т-клеток и захватывайте изображения через различные интервалы времени.

Используйте программное обеспечение для отслеживания для сравнения длины смещения Т-клеток и сре