Измерение активации fc-опосредованных эффекторных функций антителами к ГК

Возьмем, к примеру, последовательные разведения антитела, нацеленного на вирус гриппа гемагглютинин, или ГК, гликопротеин, состоящий из шаровидной головки и стебля.

Добавляйте разведения к трансфицированным клеткам млекопитающих, экспрессирующим поверхностно-связанную ГК. Антитела связываются с областями стебля ГК, образуя иммунные комплексы.

Введение сконструированных Т-клеток, экспрессирующих Fc-рецепторы и кодирующих люциферазный репортер под контролем транскрипционного фактора NFAT.

Во время инкубации антитело, связанное с ГК, связывается с Fc-рецептором, в то время как головка ГК связывается с сиаловой кислотой, вызывая активацию Т-клеток и увеличивая концентрацию цитозольного кальция.

Эта активация инициирует сигнальный каскад, который приводит к дефосфорилированию NFAT, запуская его ядерную транслокацию.

NFAT связывается со своими ответными элементами в геноме, управляя экспрессией люциферазы.

Добавьте проникающий в клетки биолюминесцентный субстрат. Люцифераза окисляет подложку, вырабатывая сигнал.

Снижение люминесценции при снижении концентрации антител подтверждает активацию Т-клеток, опосредованную специфическими антителами к стеблю HA.

Чтобы оценить способность специфич