Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:10 мин. • July 8th, 2025
Приготовьте трансфекционную смесь, добавив соответствующий катионный полимер и отдельные плазмидные векторы для генов антител с тяжелой и легкой цепью.
Положительно заряженный полимер связывается с отрицательно заряженными плазмидами, образуя комплексы.
Добавьте эту трансфекционную смесь в многолуночный планшет, содержащий культуру эмбриональных клеток почек человека в среде, не содержащей сыворотки, и инкубируйте.
Комплексы попадают в клетки через эндоцитоз, вызывая эндосомальный отек и разрыв, высвобождая их в цитоплазму.
Катионный полимер образует поры в ядерной мембране, облегчая проникновение векторов и обеспечивая их транскрипцию с последующей трансляцией в белки с тяжелой и легкой цепью.
Эти белки перемещаются в эндоплазматический ретикулум, где белки тяжелой и легкой цепи димеризуются и ковалентно связываются дисульфидными связями, образуя антитела.
Антитела перемещаются в аппарат Гольджи для дополнительных посттрансляционных модификаций и упаковываются в везикулы для внеклеточного высвобождения.
Соберите среду, содержащую высвобождающиеся антитела. Добавьте среду, не содержащую сыворотки, для продолжения выработки антител.
Подготовьте клетки HEK в дополненном DMEM и выраст
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео