Способ получения рекомбинантных антител против металлопептидазы

Начните с пробирки, содержащей трансфекционный агент на основе катионных липидов, и добавьте рекомбинантные экспрессирующие плазмиды.

Плазмида несет ген, кодирующий рекомбинантные антитела, нацеленные на металлопептидазу, и зеленый флуоресцентный белок или GFP под одним промотором, в то время как ген устойчивости к антибиотикам находится под другим промотором.

Положительно заряженные липиды взаимодействуют с отрицательно заряженной плазмидой, образуя комплекс.

Перенесите комплексы в многолуночный планшет, содержащий клетки млекопитающих, что позволит плазмиде проникнуть в цитоплазму.

Плазмида достигает ядра и транскрибируется в мРНК для белков устойчивости к антибиотикам и бицистронных мРНК, кодирующих рекомбинантные антитела и GFP.

Эти мРНК приводят к производству рекомбинантных антител, GFP и белков устойчивости к антибиотикам.

После трансфекции замените среду средой, обогащенной сывороткой.

Вводите антибиотик, селективно удаляя нетрансфицированные клетки, в то время как устойчивые к антибиотикам трансфицированные клетки выживают.

Используя метод сортировки клеток, активированных флуоресценцией, соберите зеленые флуоресцентные клетки, экспрессирующие рекомбинантные антитела.

Разв