Анализ искусственной активации in vitro для изучения активации Fc-рецептора антителами

Примите суспензию естественных киллеров, или NK-клеток.

Добавьте моноклональные антитела к CD20 и инкубируйте.

В отсутствие раковых клеток-мишеней, экспрессирующих антиген CD20, Fc-область антител связывается с рецепторами FcγRIIIa на поверхности NK-клеток.

После инкубации добавьте охлажденную среду. Центрифугируйте и удалите несвязанные антитела.

Далее добавьте антитела к легкой цепи κ человека. Инкубировать.

Эти вторичные антитела связываются с κ легкой цепью моноклональных антител.

Сшивание антител имитирует связывание с антигеном-мишенью, запуская внутриклеточный сигнальный каскад.

Это вызывает искусственную стимуляцию NK-клеток в отсутствие раковых клеток.

Активированные NK-клетки подвергаются цитоскелетной перестройке и высвобождают цитотоксические гранулы.

Далее клетки вырабатывают хемокины и цитокины.

По истечении желаемой продолжительности добавьте охлажденную среду, чтобы остановить стимуляцию клеток.

Центрифугируйте пробирку. Соберите надосадочную жидкость и клеточную гранулу для последующего анализа функций эффекторных NK-клеток, опосредованных антителами.

Диспонируйте 100 микролитров ресуспендированных естественных клеток-киллеров в 1,5-миллилитровые пробирки или 96-лу