Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:53 мин. • July 8th, 2025
Возьмем, к примеру, эукариотические векторы экспрессии, кодирующие либо тяжелую цепь антител, либо легкую цепь антител, клонированную из антиген-специфических В-клеток.
Ввести полиэтиленимин, катионный полимер, который электростатически взаимодействует с отрицательно заряженными векторами, образуя полиплексы.
Инкубируйте клетки млекопитающих с полиплексами, которые прикрепляются к клеткам и интернализуются посредством эндоцитоза. Образующиеся эндосомы сливаются с лизосомами.
Полимеры в полиплексах вызывают осмотическое набухание везикулы, приводящее к ее разрыву и высвобождению векторов.
Высвобожденные векторы попадают в ядро и транскрибируются в мРНК с тяжелой и легкой цепью, которые транслируются через рибосомы эндоплазматического ретикулума.
Полученные пептидные цепи собираются в антитела, которые транспортируются к Гольджи и упаковываются в секреторные везикулы.
При слиянии секреторных везикул и клеточной мембраны антитела высвобождаются внеклеточно
.Соберите содержащую антитела надосадочную жидкость для последующих анализов.
За день до трансфекции засейте 15 000 эмбриональных клеток почек человека в 200 микролитрах модифицированной орлиной среды Dulbecco с добавлением 10% эмбр
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео