Усиленная конвекцией доставка антител в мозг мыши

Закрепите мышь под наркозом со средним разрезом черепа в стереотаксической рамке.

Обнаружьте брегму, точку отсчета на черепе, и определите место инъекции.

Создайте отверстие для заусенцев в месте расположения, не допуская повреждения твердой мозговой оболочки, покрывающей мозг.

Возьмите шаговый катетер, наполненный антителами, установленный на стереотаксическом роботе и подключенный к инфузионному насосу.

Катетер состоит из капилляра из плавленого кремнезема, выступающего из металлической иглы, создавая ступенчатый внешний диаметр в точке слияния.

Введите катетер в паренхиму головного мозга. Запустите инфузионный насос для создания градиента давления в отверстии катетера и доставки антител с контролируемой скоростью — метод, известный как доставка с усилением конвекции.

Ступенчатый диаметр сдавливает ткань, создавая уплотнение.

Уплотнение предотвращает рефлюкс жидкости и позволяет распределять большие объемы антител, снижая при этом риск повреждения тканей.

Для введения антител в стриатум мыши подтвердите отсутствие реакции на щипки кожи у мыши, находящейся под наркозом, и побрейте голову триммером для волос. Продезинфицируйте кожу ватными тампонами, смоченными в растворе йода.

С помощью скальпеля сделайте 10-миллиметровый разрез кожи вдоль средней линии черепа, заканчивающийся на уровне глаз. Зафиксируйте мышь в стереотаксической рамке с помощью носового зажима и ушных планок, следя за тем, чтобы поверхность черепа была горизонтальной и плотно закреплена.

Поместите шприц в стереотаксический робот и синхронизируйте сверло с наконечником катетера в опорной точке. Используйте щипцы для втягивания кожи, а также локализуйте брегму на поверхности черепа. Определите брегму в программном обеспечении с помощью наконечника сверла и переместите сверло в 1-миллиметровое фронтальное и 2-миллиметровое боковое положение от брегмы.

Просверлите отверстие для заусенца, стараясь не повредить твердую мозговую оболочку, и переместите шприц на отверстие для заусенца. Выдавите из шприца от 0,5 до 1 микролитра, чтобы в катетере не осталось пузырьков воздуха. Начните доставку, усиленную конвекцией, как показано на рисунке, наблюдая за поверхностью черепа на предмет любых следов обратного потока жидкости из места инъекции.

В конце родов и удаления катетера запустите инъекционный насос со скоростью 0,2 микролитра в минуту, чтобы проверить наличие признаков засорения катетера во время инъекции. Если засорения не произошло, следует немедленно заметить каплю инъекционной смеси, выходящую из кончика катетера.