Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:28 мин. • July 8th, 2025
Возьмем колонку FPLC, содержащую пористую стеклянную смолу с иммобилизованным белком А — бактериальным белком, связывающим антитела. Уравновесьте колонку нейтральным буфером pH.
Добавьте жидкость для клеточных культур, собранную из клеток яичников китайского хомяка, содержащую моноклональные антитела и загрязняющие белки и ДНК.
Белок А связывается с Fc-областью антител, обездвиживая их.
Некоторые загрязнения неспецифически прикрепляются к смоле, в то время как остальные протекают через нее.
На хроматограмме повышенное поглощение ультрафиолета во время загрузки образца указывает на высокую концентрацию белка в протоке.
Мойте с уравновешивающим буфером, чтобы удалить несвязанные загрязнения, на что указывает снижение впитывающей способности.
Промойте буфером с высоким содержанием соли, нарушая неспецифические взаимодействия и удаляя загрязнения, на которые указывает небольшой пик примесей.
Добавьте буфер для элюирования с низким pH, чтобы нарушить взаимодействие антител с белком А и элюировать антитела, которые собираются путем отслеживания соответствующего пика.
Нейтрализуйте pH собранных антител для предотвращения деградации.
Начните с открытия программного обеспечения, подключенно
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео