Анализ для измерения титра нейтрализующих антител, специфичного к респираторно-синцитиальному вирусу
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 5:01 мин. • July 8th, 2025
Принимайте серийно разбавленную, инактивированную теплом сыворотку крови человека, содержащую респираторно-синцитиальный вирус или РСВ-специфические нейтрализующие антитела.
Добавьте вирусную суспензию. Антитела нейтрализуют вирусы в зависимости от разведения.
Введите смесь в монослои эпителиальных клеток человека и инкубируйте для адсорбции вирусов.
Выбросьте смесь. Добавьте карбоксиметилцеллюлозосодержащие среды, формируя полутвердое покрытие. Инкубировать.
РСВ использует механизмы клетки-хозяина для синтеза вирусной РНК и белков, которые впоследствии собираются и отпочковываются в виде отдельных вирионов.
Инфицированные клетки в конечном итоге погибают. Карбоксиметилцеллюлоза ограничивает движение вируса, вызывая локализованную инфекцию и гибель клеток, образуя бляшки.
Снимите накладку.
Зафиксируйте ячейки ацетонсодержащим буфером. Введите блокирующий буфер, содержащий детергент, для проникновения в клетки и предотвращения неспецифических взаимодействий антител.
Добавьте первичные антитела, нацеленные на вирусные белки.
Наложение флуорконъюгированных вторичных антител, нацеленных на первичные антитела.
Сделайте снимки лунок для количественного определения флуоресцентных бляшек.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео