Обнаружение островковых аутоантител человека с помощью электрохемилюминесцентного анализа

Чтобы обнаружить островковые аутоантитела — биомаркер диабета 1 типа — берут образцы сыворотки крови человека и добавляют уксусную кислоту для ингибирования интерферирующих компонентов.

Инкубируйте, а затем добавьте щелочной буфер для нейтрализации кислоты.

Перенесите обработанную сыворотку в многолуночный планшет, содержащий смесь аутоантигенов островков человека, включая биотинилированный захват и конъюгированные с рутением антигены, каждый в оптимальной концентрации для анализа.

Островковое аутоантитело в положительном образце соединяет рутений-конъюгированный антиген с биотинилированным антигеном захвата, образуя комплекс антиген-антитело.

Переложите смесь в покрытую стрептавидином электрохемилюминесцентную пластину, предварительно обработанную блокирующим агентом и снабженную рабочим и противоэлектродами.

Инкубируйте, чтобы обеспечить взаимодействие биотинилированного комплекса со связанным стрептавидином, а затем промойте.

Добавьте буфер, содержащий трипропиламин или ТФК.

В электрохемилюминесцентном приборе подача напряжения между электродами инициирует окисление рутения и ТФК, образуя радикалы ТФК.

Радикалы TPA возбуждают комплексы рутения, которые испускают фотоны, возвраща