Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:48 мин. • July 8th, 2025
Начните с мембран из фильтровальной бумаги, функционализированных аминами, и погрузите их в глутаральдегид, реагент для сшивания.
Глутаральдегид вступает в реакцию с аминогруппами посредством амино-альдегидной реакции.
Поместите диски в трубку. Добавьте воду, встряхните и аспирируйте, чтобы удалить остатки глутарового альдегида.
После сушки введите антитела захвата, специфичные для фрагмента иммуноглобулина-G-Fc. Аминные группы на этих антителах взаимодействуют с альдегидными группами на бумажных дисках, способствуя их ковалентной иммобилизации.
Промойте, чтобы удалить несвязанные антитела, и введите блокирующий буфер для предотвращения неспецифического связывания.
Далее добавьте на бумажный диск тестовый образец, содержащий молекулы иммуноглобулина G. Молекулы иммуноглобулина G взаимодействуют с антителами захвата.
Наложение на пероксидазу-конъюгированную с хреном IgG-Fc-специфические антитела для детектирования, которые взаимодействуют с предварительно связанным иммуноглобулином G.
Промойте для удаления несвязанных антител и добавьте смесь хромогенного субстрата и перекиси водорода.
В присутствии перекиси водорода пероксидаза хрена катализирует окисление хромогенного субстрата, г
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео