Метод in vivo для отслеживания индуцированного биспецифическими антителами транспорта Т-клеток в опухоли

Возьмем, к примеру, мышь под наркозом с ослабленным иммунитетом, несущую ксенотрансплантат подкожной опухоли, который сверхэкспрессирует опухолеассоциированный антиген или TAA.

Ретроорбитально вводить эффекторные Т-клетки, экспрессирующие фермент люциферазу.

Подкожно вводите интерлейкин 2, цитокин, поддерживающий эффектор выживания Т-клеток.

Ретроорбитально вводите биспецифические антитела, сконструированные таким образом, чтобы содержать сайты связывания для Т и опухолевых клеток. Дайте мыши восстановиться.

Антитела и Т-клетки достигают опухоли через кровоток.

Антитела связываются с CD3 на Т-клетках и TAA на опухолевых клетках, заставляя эффекторные Т-клетки высвобождать токсины, которые инициируют апоптоз в опухолевых клетках, и высвобождают хемокины, которые привлекают больше Т-клеток в опухоль.

Обезболите мышь, ретроорбитально введите субстрат люциферазы и приступайте к визуализации in vivo.

Люцифераза внутри Т-клеток окисляет субстрат, выделяя биолюминесценцию.

Наблюдайте за биолюминесценцией с течением времени. Величина сигнала коррелирует со степенью инфильтрации Т-клеток внутри опухоли.

После обезболивания мыши с помощью иглы 26-го калибра введите 20 миллионов Т-клеток в 10