Метод иммунофлуоресценции с двойным мечением для визуализации белков хозяина и патогена в инфицированной клетке

Начинают с фиксированных и проникающих эпителиальных клеток, инфицированных патогенным паразитом.

Добавьте блокирующий буфер для предотвращения связывания неспецифических антител.

Накладывают на мышь поликлональные первичные антитела, специфически взаимодействующие с белками паразита.

Добавьте дальний красный флуорофор меченный вторичные антитела, которые взаимодействуют с паразитическими первичными антителами, связанными с белками.

Промойте, чтобы удалить несвязанные антитела. Блокируйте антителами против мыши, которые связываются с первичными антителами, сводя к минимуму перекрестную реактивность во время мечения белка хозяина.

Добавьте мышиные моноклональные первичные антитела, нацеленные на рибонуклеопротеины хозяина в эпителиальных клетках.

Наложите смесь зеленых меченых флуорофором вторичных антител и красного фторконъюгированного фаллоидина, облегчая мечение первичных антител, связанных с белками хозяина, и актина соответственно.

Постирайте с помощью буфера. Монтируйте с использованием среды, содержащей краситель ДНК, придавая синюю окраску ядру хозяина, ядру паразита и кинетопласту.

Проанализируйте образцы с помощью конфокального микроскопа. Метод иммунофлуоресценции с двой