Получение антител из культуры периодического разрастания трансфицированных клеток млекопитающих

Начните с колбы, содержащей стабильно трансфицированные клетки млекопитающих в бессывороточной среде с добавлением неионогенного поверхностно-активного вещества для предотвращения агрегации клеток.

Эти клетки несут модифицированный геном, содержащий интегрированные гены тяжелой и легкой цепи для производства терапевтических антител.

Введите триптон, богатый питательными веществами источник пептидов и аминокислот, необходимых для клеточного метаболизма.

Клетка использует эти аминокислоты и пептиды и размножается, что приводит к избыточному росту, который способствует более высокому выходу антител.

Экспрессия генов в клетках стимулирует производство полипептидов с тяжелыми и легкими цепями.

В эндоплазматическом ретикулуме эти цепи сворачиваются и димеризуются с помощью межцепочечных дисульфидных связей, образуя терапевтические антитела.

В аппарате Гольджи антитела претерпевают посттрансляционные модификации. Затем они упаковываются в везикулы и выпускаются в среду.

Инкубируйте клетки в течение более длительного времени, чтобы увеличить выработку антител.

Когда жизнеспособность клеток начинает снижаться, собирайте надосадочную жидкость.

Отфильтруйте надосадочную жидкость, содержащую терапевтические антитела, и храните ее при более низкой температуре для последующего использования.

Затравочные клетки по 2 х 10 по⁵ клеток на миллилитр в 100 миллилитрах бессывороточной среды в двух колбах. Инкубируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислом газе со скоростью 120 оборотов в минуту в течение 24 часов. К культуре, обогащенной питательными веществами, добавьте триптон до конечной концентрации 0,5%. Затем используйте среду, не содержащую сыворотки, чтобы выровнять объем недобавленной культуры. Инкубируйте клетки еще семь дней.

Начиная с восьмого дня культивирования, ежедневно подсчитывайте клетки с помощью гемоцитометра для контроля жизнеспособности клеток. Как только жизнеспособность клеток достигнет менее 80%, соберите культуру центрифугированием при 3000-кратном g в течение 15 минут. Затем отфильтруйте и простерилизуйте надосадочную жидкость через фильтр 0,22 микрометра. Храните надосадочную жидкость при температуре 4 градуса Цельсия в краткосрочной перспективе или замораживайте при температуре 4 градуса Цельсия в долгосрочной перспективе.