Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:03 мин. • July 8th, 2025
Возьмем колонку аффинной хроматографии, содержащую шарики агарозы, конъюгированные с белком А, белком, связывающим антитела.
Добавьте связующий буфер с нейтральным pH для балансировки колонки.
Загрузите супернатант культуры из клеточной культуры, продуцирующей антитела, содержащей моноклональные антитела и загрязняющие клеточные белки.
Нейтральный pH способствует связыванию белка А с Fc-областью антител, в то время как загрязняющие вещества проходят через него.
Измерьте поглощение ультрафиолета проходящим потоком, чтобы создать хроматограмму. Высокая абсорбционная способность при загрузке образца указывает на наличие несвязанных белков в протоке.
Промойте колонку связующим буфером, чтобы удалить неспецифически связанные загрязнения.
Добавьте элюирующий буфер с низким pH, чтобы нарушить взаимодействие антител к белку А. Соберите элюированные антитела, контролируя пик абсорбции.
Нейтрализуйте pH для предотвращения деградации антител и перенесите их в центробежный фильтр.
Центрифуга для концентрации антител и ресуспендирования в буфере для последующих анализов.
После подготовки буферов и инициализации системы FPLC в соответствии с текстовым протоколом с помощью редактора методов настр
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео