Методика окрашивания органа цельного крепления для трехмерной визуализации почки

Возьмите неподвижную почку мыши. Липиды в тканях вызывают рассеяние света, а пигменты вызывают поглощение света, делая клетки непрозрачными.

Обработайте ткань препаратом CUBIC-L для удаления липидации и обесцвечивания. Аминоспирт в CUBIC-L удаляет липиды и пигменты, сводя к минимуму рассеяние света и повышая прозрачность.

Молекулы детергента в CUBIC-L также проникают в клетки.

Введение первичного коктейля антител, который связывается с цитоплазматической тирозингидроксилазой в нейронах симпатических нервов и альфа-гладкомышечным актином в гладкомышечных клетках сосудов.

Добавьте меченные флуорофорами вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами.

Выполните постфиксацию тканей для сохранения лечения антителами.

Погрузите ткань в CUBIC-R+, который заменяет воду и соответствует показателю преломления белков, что еще больше минимизирует рассеяние света и повышает прозрачность.

Под световым флуоресцентным микроскопом световые листы освещают ткани, возбуждая флуорофоры.

Захватите свет, излучаемый флуорофором, и реконструируйте трехмерное изображение, отображающее распределение симпатических нервов вокруг артерий в почке.

Для начала сразу после перфузионной фиксации и за