JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 4:06 мин • July 8th, 2025
Дайте мышке в клетке употреблять питьевую воду, смешанную с синтетическим сульфатированным полисахаридом, который, как известно, вызывает колит, воспалительное заболевание кишечника.
Этот полисахарид проникает в просвет кишечника и нарушает эпителиальный барьер, позволяя комменсальным микробам проникать в ткани, что приводит к воспалению.
Моноциты проникают в ткань и дифференцируются в макрофаги.
Внутривенно ввести фторконъюгированные антитела в хвост мыши.
Антитела достигают толстой кишки и связываются с гликопротеином-мишенью на макрофагах, маркируя клетки.
Обезболите мышь. Сбрейте шерсть на животе, чтобы свести к минимуму отражение и поглощение света во время визуализации.
Поместите мышь в смотровую кассету и вставьте ее в флуоресцентный томограф или сканер FMT.
При возбуждении флуорофор испускает флуоресценцию. Захватите флуоресцентные изображения отражения, чтобы реконструировать трехмерную карту, показывающую пространственное распределение флуорофоров.
Повышенная интенсивность флуоресценции указывает на повышенную инфильтрацию макрофагов.
Чтобы вызвать колит, заполните питьевой запас подопытных мышей 2 граммами декстрана сульфата натрия, или DSS, растворенного в 100 миллилитрах автоклавной питьевой воды, что составляет 5 миллилитров воды на одну мышь в день. За 24 часа до сканирования загрузите интересующий коктейль антител в стерильный шприц, защищенный от света, и введите антитела внутривенно в хвостовые вены подопытных животных.
В день эксперимента используйте электрическую бритву, чтобы сбрить шерсть в области живота подопытных животных, чтобы свести к минимуму отражение и поглощение света. Используя тканеимитирующий фантом с определенной толщиной и характеристиками поглощения, заполните фантом определенным объемом исследуемого раствора антитела и измерьте флуоресценцию на устройстве FMT.
Затем на ветеринарном флуоресцентно-опосредованном томографе или устройстве FMT для мелких животных нажмите «Новое исследование» и включите соответствующие индикаторы в описание исследования, включая параметры визуализации и дозы. Создавайте учебные группы в соответствии с планом экспериментального исследования, оснащая каждую группу соответствующим количеством животных.
Когда система будет откалибрована для использования с индикаторными конструкциями, поместите первую мышь, находящуюся под наркозом, в лежачую на спине кассету для осмотра с температурой 42 градуса Цельсия. Вставьте кассету в систему визуализации, и выберите подходящий образец из соответствующей исследуемой группы. Выберите вводимый индикатор, чтобы убедиться, что значения концентрации индикатора рассчитаны правильно, и получить изображение отражения флуоресценции на соответствующей длине волны для сканирования.
Нажмите кнопку Получить изображение, чтобы обвести поле сканирования и убедиться, что поле сканирования отображается в виде наложения на изображение флуоресцентного отражения. Отрегулируйте поле сканирования так, чтобы оно окружало интересующую область, стараясь избегать попадания воздуха или остатков шерсти.
В зависимости от цели изображения выберите разрешение поля сканирования, чтобы задать количество точек данных изображения в поле сканирования. Затем нажмите «Сканировать», чтобы начать получение изображения на выбранной длине волны. В конце сканирования извлеките животное из кассеты, чтобы животное полностью восстановилось под наблюдением, прежде чем вернуться в клетку. Затем ТФМ может быть повторена в различные моменты времени в зависимости от того, насколько это целесообразно с экспериментальной точки зрения.
В данном исследовании изучается индукция колита у мышей с использованием синтетического сульфатированного полисахарида, а также анализируется инфильтрация макрофагов с помощью флуоресцентно-оптической томографии (FMT). Методология включает введение декстрансульфата натрия и использование конъюгированных с флуорофором антител для визуализации макрофагов в толстой кишке.
Флуоресцентная томография (FMT) позволяет проводить неинвазивную количественную оценку кишечного воспаления, вызванного макрофагами, на мышиных моделях, что способствует валидации мишеней на ранних стадиях исследований воспалительных заболеваний кишечника. Данный рабочий процесс визуализации предоставляет пространственные данные и данные об интенсивности инфильтрации иммунными клетками, что позволяет снизить механистические риски и повысить прогностическую достоверность при доклиническом поиске. Интеграция FMT в процессы разработки лекарственных средств улучшает трансляционную преемственность и принятие решений по портфелю программ, ориентированных на иммунологию.
Визуализация на основе FMT интегрируется в континуум от поиска мишеней до доклинических исследований, связывая ранние механистические исследования и трансляционную валидацию биомаркеров в моделях воспалительных заболеваний.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026