Обнаружение антидонорских аллоантител HLA у реципиентов органов на основе пептидной матрицы

Возьмем пептидную матрицу, полученную из человеческого лейкоцитарного антигена донора или последовательности HLA, содержащей различные пептиды на целлюлозной мембране.

Каждый пептид несет по крайней мере одно аминокислотное несоответствие между последовательностью HLA донора и реципиента, представляя собой потенциальный эпитоп для антитело-опосредованного отторжения органа.

Лечите блокирующим буфером для предотвращения взаимодействия неспецифических антител.

Добавьте сыворотку реципиента, собранную после трансплантации органов, содержащую аллоантитела.

Эти антитела, образующиеся против HLA донора, связываются со своим эпитопом-мишенью.

Добавьте пероксидазу-конъюгированное вторичное антитело, которое связывается с аллоантителом.

Добавьте хемилюминесцентный субстрат и перекись водорода. Пероксидаза использует перекись водорода для окисления подложки, излучая свет.

Отсканируйте мембрану для получения изображения.

Добавьте буфер для удаления связанных антител. Провести исследование с помощью предтрансплантационной сыворотки реципиента и получить изображение.

По сравнению с изображением до трансплантации, темные пятна на изображении после трансплантации указывают на донор-специфичные эп