Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:57 мин. • July 8th, 2025
Поместите чашку для культивирования с эмбрионами дехорионированных рыбок данио, помещенными в агарозу, над предметным столиком под микроскопом.
Возьмите раствор красителя, содержащий конъюгаты антител в низкой концентрации, несущий красное флуоресцентное меченое антитело и антитело против DeltaD.
Введите раствор красителя в задний желудочек мозга эмбриона, нацеливаясь на активно делящиеся предшественники радиальной глии или RGP.
Освободите внедренный эмбрион и восстановите его в богатой питательными веществами среде.
Во время восстановления флуоресцентные конъюгаты взаимодействуют с несколькими молекулами DeltaD лиганда Notch на RGP, инициируя интернализацию и образование эндосом.
Низкая концентрация конъюгата позволяет несвязанным DeltaD-лигандам взаимодействовать с рецептором Notch, активируя сигнальный путь Notch в RGP.
После выздоровления перенесите обезболенный эмбрион с агарозой в стеклянную чашку тыльной стороной вниз для визуализации.
Выполните покадровую флуоресцентную визуализацию для захвата деления клетки, которая показывает асимметричное разделение DeltaD-содержащих флуоресцентных эндосом на две дочерние клетки, подтверждая активацию передачи сигналов Notch/DeltaD.
Пом
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео