JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 3:31 мин • July 8th, 2025
Начните с микрочипа антител, на котором напечатаны специфические антитела.
Каждое пятно содержит уникальное антитело против определенного штамма цианобактерий.
Обработайте чип блокирующим буфером, чтобы свести к минимуму неспецифические взаимодействия.
Соберите чип в гибридизационную кассету, обладающую несколькими лунками.
Введите образец окружающей среды в лунки и инкубируйте его в оптимизированных условиях.
Образец содержит различные бактерии, в том числе различные штаммы цианобактерий, которые взаимодействуют со специфическими антителами на напечатанном чипе. Промойте чип, чтобы удалить несвязанные бактерии.
Добавьте смесь антител, содержащую меченые флуорофорами антитела к цианобактериальным штаммам, взаимодействующие со специфическими антигенами на соответствующих цианобактериальных клетках. Удалите несвязанные антитела.
Разберите кассету, промойте и высушите чип, затем отсканируйте его.
Флуоресценция в определенных пятнах указывает на присутствие определенных штаммов цианобактерий в образце.
Установите предметное стекло в кассету для гибридизации микрочипов размером 3 на 8 лунок, следуя инструкциям поставщика. В качестве альтернативы, после модификации шаблона печати антител, настройте кассету на заказ, как показано здесь, или просто используйте предметные стекла для обложки.
После сборки предметного стекла и кассеты внесите пипетку до 50 микролитров экстракта каждого образца или его разведения в экстракционном инкубационном буфере в каждую лунку кассеты. В качестве альтернативы можно загрузить образцы в другие инкубационные устройства или просто использовать крышечные стекла.
В качестве холостого контроля пипетируйте 50 микролитров буфера TBST-RR по крайней мере в две отдельные лунки кассеты. Инкубируйте образцы при температуре окружающей среды в течение 1 часа и перемешивайте путем пипетирования каждые 15 минут или инкубируйте при температуре 4 градуса Цельсия в течение 12 часов.
Чтобы промыть микрочипы, положите кассету вниз и осторожно постучите ее по чистой впитывающей бумаге. Затем промойте лунки, добавив в каждую из них 150 микролитров инкубационного буфера для экстракции, и удалите буфер, постучав по абсорбирующей бумаге, как и раньше. Повторите стирку еще три раза.
В каждую лунку добавьте 50 микролитров смеси флуоресцентных антител, содержащей 17 антител против цианобактериального штамма. Инкубируйте образцы при температуре окружающей среды в течение 1 часа или при температуре 4 градуса Цельсия в течение 12 часов.
Чтобы промыть микрочипы, осторожно положите кассету вниз и аккуратно постучите ее по чистой впитывающей бумаге. Затем добавьте 150 микролитров инкубационного буфера для экстракции, прежде чем удалить его, постучав по бумажному полотенцу. Повторите стирку три раза. Затем разберите кассету и погрузите предметное стекло в раствор 0,1x PBS для быстрого промывки. Быстро центрифугируете, как и раньше, чтобы высушить предметное стекло.
С помощью флуоресцентного сканера отсканируйте предметное стекло на флуоресценцию на максимальном пике излучения для дальнего красного флуоресцентного красителя. Сделайте несколько снимков микрочипов при разных параметрах сканирования, изменяя значение усиления.
В данной работе описывается метод обнаружения специфических штаммов цианобактерий с использованием микрочипа с антителами. Процесс включает обработку проб из окружающей среды антителами для идентификации и количественного определения различных взаимодействий цианобактерий.
Чипы антительных микромассивов позволяют осуществлять мультиплексное детектирование штаммов цианобактерий в сложных природных образцах, обеспечивая высокопроизводительную биологическую характеристику. Эта возможность оптимизирует рабочие процессы по поиску новых соединений, предоставляя количественные штаммоспецифические данные, которые имеют решающее значение для валидации мишеней и снижения механистических рисков. Данный подход актуален для биофармацевтических групп, нуждающихся в надежных масштабируемых инструментах для микробиологического профилирования и разработки анализов.
Данный метод антитело-микрочипов является частью процесса от начального поиска до доклинических исследований, позволяя проводить раннее профилирование микробиома и обосновывать решения по идентификации ведущих кандидатов.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026