Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:39 мин. • July 8th, 2025
Возьмем многолуночный планшет, содержащий клетки млекопитающих, инкапсулированные в гидрогелевую систему, имитирующую естественную среду внеклеточного матрикса.
Удалите питательную среду. Обработайте фиксирующим буфером для сшивания белков, сохраняя клеточную целостность.
Добавьте раствор, содержащий моющее средство, чтобы проникнуть в клеточную мембрану.
Вводите блокирующий раствор для предотвращения связывания неспецифических антител на последующих этапах.
Добавьте первичный коктейль антител, который проникает в клетки и специфически связывается с цитоплазматическими промежуточными филаментами и целевым транскрипционным фактором.
Удалите несвязанные антитела. Введите флуоресцентно меченные вторичные антитела и ядерный краситель для флуоресцентного мечения ДНК.
Удалите несвязанные молекулы.
Закрепите гидрогелевую культуру на предметном стекле с помощью монтажного материала.
Используйте конфокальный микроскоп для наблюдения за иммуноокрашенными клетками.
Сначала отсасывайте среду из каждой лунки. Затем промойте лунки 1 миллилитром теплого DPBS. После того, как промывка будет завершена, добавьте в каждую лунку по 750 микролитров раствора для фиксации. Затем инкубируйте 24-луночный п
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео