Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:59 мин. • July 8th, 2025
Начните с приросших клеток эритробластов человека.
Введение вирусных модифицированных пептидами конъюгатов антител. Эти конъюгаты содержат последовательность ядерной локализации, или NLS, от вируса и остаток холевой кислоты.
Во время инкубации конъюгаты антител взаимодействуют с рецепторами клеточной поверхности и интернализуются в эндосомах.
Холевая кислота в конъюгате помогает выйти из эндосомального компартмента, способствуя внутриклеточному накоплению, в то время как транспортные белки и NLS способствуют их ядерной локализации.
Введите трипсин и ЭДТА-содержащий буфер для отделения клеток и удаления поверхностно связанных конъюгатов.
Добавьте среду, обогащенную сывороткой, для подавления активности трипсина.
Центрифуга для сбора клеток, их фиксация и пропитка.
Ввести дальний красный флуорофор меченный вторичные антитела, связывающиеся с локализованными конъюгатами и смывающие.
Обработайте ядерным красителем.
Наблюдайте под конфокальным микроскопом и получайте изображения на различных плоских глубинах.
После обработки изображения на клетке видны небольшие зеленые флуоресцентные очаги внутри цитоплазмы и ядра, подтверждающие внутриклеточное распределение конъюгатов антител.
Обраба
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео