Контролируемая инфузия Aβ-пептид-специфических антител и Aβ-олигомеров в гиппокамп крысы

Возьмите бодрствующую крысу с двумя направляющими канюлями, имплантированными с обеих сторон в гиппокамп.

Канюли подключаются к подкожно имплантированным осмотическим насосам, содержащим бета-амилоидные или Aβ-специфические и контрольные антитела соответственно.

Высокая концентрация антител в насосе вызывает диффузию воды из окружающей ткани через его внешнюю полупроницаемую мембрану, расширяя осмотический слой.

Это расширение сжимает резервуар антител, способствуя контролируемому высвобождению антител.

Прикрепите две внутренние канюли к катетерам, наполненным стерильной водой, подключенным к инфузионному насосу.

Наполните канюли водой.

Далее отсасывайте небольшой объем воздуха, создавая пузырь.

Теперь заполните канюли нейротоксичными олигомерами Aβ, растворимыми агрегатами пептидов Aβ.

Вставьте внутренние канюли в направляющие канюли. Запустите насос для контролируемой подачи олигомеров, используя пузырьки воздуха для предотвращения обратного потока и отслеживания скорости инфузии.

Вводите повторные инъекции олигомеров в течение необходимой продолжительности.

Модель готова к изучению взаимодействия олигомер-антител Aβ.

За сутки до установки заполните осмотические насосы антителом 6E10 или контрольным антителом IgG1 в соответствии с инструкциями производителя. Поместите насосы в стерильную дистиллированную воду и держите при температуре 37 градусов Цельсия в течение ночи, чтобы они активировались.

После того, как крыса была обезболена 3% изофлураном и побрилась между лопатками, продезинфицируйте кожу раствором 2% хлоргексидина глюконата и 2% изопропилового спирта. Сделав надрез скальпелем в 2 сантиметра между лопатками, расположите катетеры ПЭ-50, соединенные с направляющей канюлей.

Далее скальпелем разрежьте концы катетеров ПЭ-50, содержащих стоматологический цемент. Подсоедините осмотические насосы к катетерам PE-50 и добавьте немного стоматологического цемента в место соединения насоса и катетера, чтобы закрепить соединение. Наконец, плотно прошейте кожу швами 4/0. Поместите животное обратно в клетку на теплую грелку и наблюдайте за ним, пока оно не очнется от изофлурановой анестезии.

После приготовления раствора бета-амилоидного олигомера, как сообщалось ранее, дайте раствору динамически и спонтанно агрегировать в течение 1 часа при комнатной температуре перед инфузией. Затем наполните каждый шприц 5 микролитрами стерильной дистиллированной воды.

Далее скальпелем разрежьте два катетера ПЕ-50 примерно до 60 сантиметров в длину. С помощью двух 1-миллилитровых шприцев с иглами 21-го калибра наполните оба катетера стерильной дистиллированной водой. Пока шприцы объемом 1 миллилитр остаются на месте, на одном конце каждого катетера подсоедините свободные концы к шприцам Гамильтона. Извлеките шприцы объемом 1 миллилитр и убедитесь, что в катетерах нет пузырьков воздуха.

Вставьте внутреннюю канюлю в конец катетеров PE-50. С помощью шприцев Гамильтона заполните каждую внутреннюю канюлю до 1 микролитра, затем создайте пузырь воздуха, оттянув поршень назад до отметки 2 микролитра.

Теперь смешайте раствор бета-амилоидного олигомера, пипетируя вверх и вниз с помощью наконечника с минимальным прилипанием. Избегайте образования пузырьков во время смешивания. Затем заполните обе внутренние канюли 1,5 микролитрами раствора бета-амилоидного олигомера, оттягивая поршни до 3,5 микролитров.

Затем отметьте линии до и после пузырька воздуха в обоих катетерах. Это служит контрольной точкой продолжающегося вливания. Положите проснувшуюся крысу в уютную обхватку и обездвижьте ее голову. Извлеките фиктивную канюлю из двухнаправляющей канюли, затем вставьте подготовленную ранее внутреннюю канюлю в направляющую канюлю. Убедитесь, что они полностью вставлены и хорошо закреплены на основании направляющей канюли. Теперь освободите крысу от уютной хватки и положите ее обратно в клетку, чтобы ограничить стресс при обращении.

Включите инфузионный насос и введите 1 микролитр раствора бета-амилоида со скоростью 0,1 микролитра в минуту. Во время инфузии убедитесь, что поршень шприца перемещается от 3,5 микролитров до 2,5 микролитров, а пузырьки воздуха в обоих катетерах PE-50 движутся непрерывно. Проверьте крысу, чтобы убедиться, что катетеры не скручиваются друг с другом.

Оставьте внутреннюю канюлю на месте еще на 5 минут после инфузии, чтобы обеспечить эффективную диффузию раствора бета-амилоида. После инфузии верните крысу в объятный захват и удалите внутреннюю канюлю и канюлю с закрытым направляющим, чтобы предотвратить рефлюкс введенного раствора. Установите муляж канюли, который остановился непосредственно перед угловым рычагом направляющей канюли. Наконец, верните животное в клетку.