Обнаружение и измерение пептидов мишеней с помощью емкостного иммунозондового биосенсора

Начните с собранной платиновой проволоки, покрытой перфторалкокси, со слоем полидофамина.

Замочите этот зонд в растворе, содержащем целевые пептид-специфические антитела, которые иммобилизуются на полидопамине, образуя иммунозонд.

Промойте и поместите иммунозонд в проточную камеру с заземляющим электродом из хлорида серебра, установив цепь.

Сначала введите буфер и подайте напряжение для активации иммунозонда, что позволит ему функционировать как батарея или конденсатор, накапливая энергию в виде электрического заряда.

Запишите электрический сигнал для создания базовой линии.

Теперь подвергните биосенсор воздействию раствора, содержащего целевые пептиды.

Эти пептиды связываются с антителами на зонде, вызывая изменение локального заряда и энергии, хранящейся в биосенсоре.

Запишите электрический сигнал. Увеличение сигнала указывает на наличие целевого пептида, в то время как величина этого сигнала коррелирует с концентрацией целевого пептида.

Сначала отрежьте 25-сантиметровый отрезок платиновой проволоки с перфторалкоксиметровым покрытием. Затем с помощью скальпеля снимите примерно 5 миллиметров перфторалкоксипокрытия с одного конца, стараясь не порезать платиновую проволоку. Теперь вставьте зачищенный конец платиновой проволоки в позолоченный 1-миллиметровый разъем для разъема. Затем с помощью плоскогубцев обжмите зубья контакта разъема вокруг зачищенного конца платинового провода и припаяйте платиновый провод к позолоченному контакту разъема.

Далее приготовьте раствор дофамина, добавив 50 мг гидрохлорида дофамина в 50 миллилитров 10 миллимолярных PBS, с pH 6, и перемешайте, помешивая. После полного растворения дофамина поместите наконечник платиновой проволоки в сосуд, содержащий только что изготовленный PBS, обогащенный дофамином. Подключите дисковый электрод из хлорида серебра к каналу заземления в головном каскаде. Затем поместите диск из хлорида серебра в сосуд, содержащий PBS с добавлением дофамина и платиновую проволоку.

Прежде чем приступить дальше, подключите проводной шунт к опорным каналам головного каскада. Откройте интерактивное программное обеспечение для сбора данных и установите протокол командного потенциала пилообразного электроосаждения, установив начальный потенциал на уровне минус 0,6 вольта, конечный потенциал на 0,65 вольта, частоту сканирования на 0,04 вольта в секунду и продолжительность осаждения на 420 секунд.

После завершения осаждения полидофамина извлеките измельченную гранулу хлорида серебра и наконечник платиновой проволоки из сосуда. Поместите наконечник провода в микротрубку, содержащую PBS pH 7,4, на 2–5 минут и убедитесь, что наконечник провода не соприкасается с боковыми сторонами или дном микротрубки. Затем готовят раствор антитела, комбинируя представляющее интерес антитело с PBS pH 7,4 в соотношении 1 к 20 в сосуде соответствующего размера.

Затем замочите осажденный полидопамином наконечник платинового электрода в растворе антитела на два часа при комнатной температуре, следя за тем, чтобы наконечник платиновой проволоки был подвешен в растворе и не лежал на внутренней поверхности микротрубки. Поместите функциональный наконечник емкостного иммунозонда в проточную камеру, стараясь никак не повредить наконечник электрода, так как это может привести к повреждению сенсорного наконечника зонда.

Перед первым экспериментальным испытанием выполните стандартный прогон TBS для кондиционирования емкостного иммунозонда, а для протокола напряжения установите положительный ступенчатый потенциал на 110 милливольт, отрицательный ступенчатый потенциал на минус 5 милливольт, продолжительность шага 20 миллисекунд и продолжительность регистрации на 600 секунд.

Далее создайте интересующий вас пептидный раствор, используя тот же TBS. Чтобы сохранить состав суперфузата, настройте систему коллектора, в которой суперфузат можно переключать между TBS и TBS, дополненным пептидами. Используйте стандартные параметры TBS и настройте протокол сбора данных с помощью пептидов, установив продолжительность сбора данных на 360 секунд.