Анализ in vitro для измерения антителозависимого клеточного фагоцитоза фагоцитами
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:03 мин. • July 8th, 2025
Возьмем флуоресцентно меченые микросферы, конъюгированные с интересующим антигеном. Иммобилизованные антигены связываются с антиген-специфическими антителами.
Добавьте лейкоциты, в том числе нефагоцитарные лимфоциты, фагоцитарные гранулоциты и моноциты. Инкубируйте смесь в физиологических условиях.
Fc-область иммобилизованного антитела связывается с Fc-рецептором на фагоците, запуская антителозависимый клеточный фагоцитоз, или ADCP.
Центрифуга для гранулирования клеток и удаления надосадочной жидкости, содержащей неинтернализованные микросферы.
Добавьте краситель для жизнеспособности, который проникает в мертвые клетки, флуоресцентно помечая их.
Центрифуга для гранулирования клеток и удаления надосадочной жидкости.
Добавьте флуоресцентно меченные антитела, которые связываются с лейкоцитами.
Центрифуга должна отбросить надосадочную жидкость и зафиксировать клетки.
С помощью проточной цитометрии сначала удаляют мертвые клетки, которые являются положительными на окрашивание на жизнеспособность.
Затем выберите жизнеспособные лейкоциты и различайте гранулоциты, моноциты и лимфоциты на основе их зернистости и рассеивающих свойств.
Измерьте интенсивность флуоресценции микросфер-положитель
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео