Иммунофлуоресцентный метод локализации вирусных белков в инфицированных клетках

Начните со предметного стекла, содержащего прилипшие клетки-хозяева.

Добавьте вирусы и позвольте им проникнуть в клетки-хозяева.

Удалите отработанное средство. Добавьте свежую среду для синтеза и транспортировки вирусного белка.

Используйте параформальдегид для сохранения морфологии клеток и расположения белка.

Добавьте молекулы детергента, чтобы сделать клетки проницаемыми.

Применение буфера блокировки для блокировки сайтов, не являющихся целевыми привязками.

Добавьте первичные антитела, которые связывают целевые вирусные белки. Удалите несвязанные антитела.

Наложение на красные флуорофор-конъюгированные вторичные антитела для флуоресцентного мечения вирусных белков. Удалите несвязанные антитела.

Добавьте флуоресцентную ядерную красительную среду для окрашивания ядер.

С помощью конфокальной микроскопии наблюдайте за расположением красных флуоресцентных вирусных белков и синих флуоресцентных ядер хозяина.

Более сильный красный сигнал вокруг синей области указывает на цитоплазматическую локализацию, в то время как более сильный сигнал внутри указывает на ядерную локализацию.

Равные уровни сигнала в синей области и вокруг нее указывают на то, что белки расположены как в ядре, так и в