Метод in vitro для идентификации врожденных и адаптивных иммунных клеток, обитающих в легких мышей

Возьмите измельченную мышиную легочную ткань в буфере для пищеварения и инкубируйте при физиологической температуре.

Буферные ферменты разрушают тканевый матрикс, разрыхляя клетки.

Растирайте для диссоциации клеточной массы и фильтруйте суспензию с помощью ситечка для изоляции отдельных клеток.

Центрифуга для удаления надосадочной жидкости с остатками тканей. Инкубируйте клетки с буфером для лизиса, чтобы лизировать эритроциты.

Центрифуга для удаления надосадочной жидкости, содержащей клеточный мусор. Ресуспензируйте клетки и перенесите их на микропланшет.

Добавьте антитела для блокировки Fc-рецепторов, предотвращая фоновое окрашивание.

Введение меченого флуорофорами коктейля антител, нацеленного на специфические поверхностные маркеры на клетках врожденного иммунитета — моноцитах, макрофагах, дендритных клетках, естественных киллерах, нейтрофилах, эозинофилах и адаптивных иммунных клетках — В- и Т-лимфоцитах.

Фиксируют и проникают в клетки. Добавьте меченные флуорофорами антитела, специфичные к внутриклеточному маркеру на моноцитах, макрофагах, дендритных клетках и эозинофилах.

С помощью проточной цитометрии классифицируют меченые иммунные клетки.

Переложите легкое в чашку Петри. И