Выделение и расщепление нейтрофильных белков

Начните с трубки, содержащей нейтрофилы. Добавьте буфер, содержащий ингибитор протеиназы, чтобы предотвратить деградацию белка.

Добавьте подходящее моющее средство, чтобы проникнуть в мембрану нейтрофилов

В ледяной бане обрабатывайте образец ультразвуком высокочастотными звуковыми волнами, чтобы нарушить клеточную мембрану, высвобождая внутриклеточное содержимое, в том числе различные белки.

Кратковременно центрифугируете, чтобы собрать содержимое со стенок пробирки и перенести его в подходящую пробирку.

Введите восстановитель и инкубируйте при высокой температуре, чтобы способствовать расщеплению дисульфидной связи, вызывающей денатурацию белков.

Остудите и введите алкилирующий реагент, который алкилирует сульфгидрильные группы.

Добавьте холодный ацетон, чтобы вызвать выпадение белка.

Центрифуга для гранулирования белков и фрагментов клеток. Удалите надосадочную жидкость и высушите на воздухе.

Введите буфер, содержащий денатурирующий агент, и ультразвук для повторного растворения белковой гранулы.

Наконец, добавьте смесь протеазы, которая расщепляет белки. Храните образец для дальнейшей обработки.

Для начала соберите нейтрофиль-дифференцированные клетки HL60 в 15-миллилитровую про