Процедура STAGE Tip для обессоливания и очистки пептидов

Возьмите STop And Go Extraction или STAGE Tip, миниатюрную очистительную колонку.

Наконечник содержит мелкие гранулы диоксида кремния, связанные с длинными цепочками углеводородов для очистки пептидов на основе гидрофобного взаимодействия.

Промыть буферами, содержащими высокий процент ацетонитрила, удаляя смоляные загрязнения.

Введите связующий буфер и центрифугу, уравновешивая колонку для оптимального связывания пептидов.

Загрузите предварительно переваренный образец пептида, полученный из дифференцированных нейтрофильных клеток, содержащих пептидные фрагменты и примеси, в том числе соли.

Центрифуга пропускает пробу через колонну. Пептидные фрагменты связываются с углеводородными цепями посредством гидрофобных взаимодействий, в то время как соли удаляются.

Добавьте связующий буфер и центрифугу, удалив оставшиеся примеси.

Введите буфер с высоким содержанием ацетонитрила для элюирования.

С помощью шприца пропустите буфер через колонку. Ацетонитрил связывается с углеводородными цепями, вытесняя пептидные фрагменты, которые вымываются вместе с буфером.

Протеомное профилирование для идентификации очищенных пептидов.

Для начала упакуйте три слоя смолы C18 в наконечник для пипетки объемо