Анализы для качественной и количественной оценки концентрации глюкозы в моче мышей

Возьмите каплю свежей мышиной мочи и погрузите в нее полоску для обнаружения глюкозы, содержащую глюкозооксидазу, пероксидазу и хромоген.

Глюкозооксидаза окисляет глюкозу с мочой, образуя глюконолактон и перекись водорода.

Кроме того, пероксидаза использует перекись водорода для катализа окисления хромогена, образуя окрашенный продукт с интенсивностью, пропорциональной концентрации глюкозы в моче.

Сравните цвет с эталонной таблицей полоски для качественной оценки уровня глюкозы в моче.

Для количественного измерения уровня глюкозы в моче возьмите многолуночный планшет со стандартами концентрации глюкозы и образец мочи мыши, собранный за определенный период.

Добавьте смесь для анализа, содержащую глюкозооксидазу, пероксидазу и реагенты для индикаторного связывания.

Глюкозооксидаза способствует окислению глюкозы, образуя глюконолактон и перекись водорода. Пероксидаза катализирует реакцию между связывающими реагентами и перекисью водорода, образуя продукт розового цвета.

С помощью считывателя микропланшетов измерьте впитывающую способность цветного изделия.

С помощью сгенерированной стандартной кривой глюкозы определите концентрацию глюкозы в моче.

Начните с того, что положите кусок чистой парапленки на ровную поверхность. Аккуратно возьмите мышку за хвост и установите ее на парапленку.

Удерживайте мышь за загривок с помощью большого и указательного пальцев, вызывая мочеиспускание мыши в качестве стрессовой реакции. Дайте капле мочи упасть на поверхность парапленки, а затем верните мышь в клетку.

Окуните конец реагентной полоски для определения глюкозы в каплю свежей мочи. Сразу же снимите полоску и положите ее плашмя на поверхность цветной стороной вверх. Затем подождите не менее 30 секунд, чтобы цвет полностью раскрылся на полоске. Сравните разработанный цвет с эталонной таблицей, предоставленной производителем.

Соберите метаболическую клетку в соответствии с инструкциями производителя и заполните сборку корма порошкообразным чау, затем прикрепите его к соответствующему металлическому язычку на верхней камере.

Закрепите опору для бутылки с водой на оставшемся металлическом язычке на верхней камере. Наполните пустую бутылку водой и вставьте ее в опору для бутылки, убедившись, что трубка сиппера находится в отверстии.

Поместите одну мышь в метаболическую клетку и накройте ее крышкой, убедившись, что крышка клетки установлена правильно. Расположите трубку для сбора мочи и трубку для сбора кала в соответствующих местах на дне нижней камеры.

Через 24 часа извлеките пробирку для сбора мочи и выполните анализ глюкозы для определения концентрации глюкозы в моче. Если анализ глюкозы не будет проводиться в тот же день, заморозьте образец мочи в морозильной камере при температуре минус 80 градусов по Цельсию.

Если вы используете замороженный образец мочи, сначала разморозьте его. Приготовьте восемь стандартов в диапазоне от 25 до 0 миллиграммов на децилитр, в соответствии с инструкциями пробирного набора.

Подготовьте стандартные лунки и лунки для образцов мочи в 96-луночной пластине, все в двух экземплярах, в соответствии с инструкцией по набору. Запустите реакцию, добавив рекомендуемое количество ферментной смеси во все лунки. Накройте тарелку крышкой и дайте ему поинкубироваться в течение 10 минут при температуре 37 градусов Цельсия. Затем считайте поглощение на расстоянии от 500 до 520 нанометров с помощью считывателя пластин.

Проанализируйте данные в соответствии с инструкциями к набору для анализа и нанесите график поглощения каждого стандарта в зависимости от концентрации глюкозы. Используйте этот график для определения концентрации глюкозы в образце мочи за 24 часа. Если концентрация мочи выходит за пределы стандартного диапазона, разбавьте образец мочи.