Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:34 мин. • July 8th, 2025
Начните с инфицированных вирусом клеток млекопитающих, которые продуцируют множественные каспазы, включая каспазу-3.
Добавьте питательную среду в контрольную лунку и среду с добавлением ингибитора каспазы-3 в тестовую лунку.
В контрольной лунке каспазы-3 распознают и разрушают вирусные нуклеопротеины и белки хозяина, необходимые для размножения вируса.
В испытательной лунке ингибитор проникает в клетку, подавляя активность каспазы-3 и препятствуя деградации белка.
Выбиваем ячейки из пластины. Добавьте лизирующий реагент и нагрейте, чтобы вызвать лизис клеток, высвобождая внутриклеточные белки.
Загрузите оба образца в SDS-полиакриламидный гель и электрофорез, чтобы разделить белки в зависимости от размера.
После электрофореза перенесите гель на промокательную пленку.
Обработайте мембрану первичными антителами против вирусных нуклеопротеинов и белков хозяина.
Промойте и наложите флуорконъюгированные вторичные антитела, связывающиеся с первичными антителами, образуя флуоресцентные полосы.
Более высокая флуоресценция в испытуемом образце указывает на снижение расщепления вируса и белка хозяина, опосредованного каспазой-3, по сравнению с контролем.
Для начала посейте клетки MDCK или A54
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео