Анализ для измерения накопления флуоресцентного зонда антибиотика в бактериальных клетках
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:02 мин. • July 8th, 2025
Возьмите пробирки, содержащие образцы бактерий.
В испытуемый образец добавьте молекулы ингибитора, чтобы блокировать насос оттока антибиотиков бактерий.
Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость.
Добавьте флуорофор-конъюгированные зонды антибиотиков, которые проникают в бактериальные клетки.
В контрольном образце отточный насос выдавливает зонды во внеклеточную среду.
В образце, обработанном ингибитором, заблокированный насос оттока не может вытеснить зонды, что приводит к их накоплению.
Центрифугируйте образцы. Выбросьте надосадочную жидкость, содержащую внеклеточные зонды.
Добавьте буфер для лизиса с последующим лизоцимом, чтобы ослабить клеточную стенку бактерии.
Выполнение циклов замораживания-оттаивания, ультразвуковой обработки и высокотемпературного воздействия для лизиса клеток.
центрифуга. Перенесите надосадочную жидкость на фильтрующую мембрану.
Промойте и соберите фильтрат, содержащий зонды.
Измерьте интенсивность флуоресценции фильтрата.
Более высокая интенсивность флуоресценции в образцах бактерий, обработанных ингибиторами, свидетельствует о потере функции оттока, что приводит к накоплению внутриклеточного зонда.
Для анализа накопления зонда нанесите запасы гл
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео