Выделение инвариантных естественных киллеров Т-клеток из мышиной модели
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:35 мин. • July 8th, 2025
Начните с внутрибрюшинного введения синтетического гликолипида мыши.
Антигенпрезентирующие клетки, или APC, интернализуют гликолипид и представляют его через неклассическую молекулу MHC CD1d.
АПК мигрируют в селезенку и взаимодействуют с инвариантными естественными киллерами Т-клетками или клетками iNKT, индуцируя активацию и пролиферацию клеток iNKT.
Соберите урожай из селезенки. Механически диссоциируйте его, чтобы получить одноклеточную суспензию.
Переложите клетки в пробирку. Добавьте градиент плотности среды и центрифугуйте для разделения лимфоцитов.
Соберите лимфоциты. Добавьте гликолипидные антигены, меченные флуорофорами CD1d-тетрамеры, которые взаимодействуют с клетками iNKT.
Удалите несвязанные тетрамеры. Наложение магнитных микрошариков, которые связываются с тетрамер-связанными флуорофорами.
Удалите несвязанные шарики и загрузите суспензию элемента на магнитную колонку.
Под действием магнитного поля связанные с шариками элементы iNKT удерживаются в колонке, в то время как остальные ячейки протекают через нее.
Извлеките колонку из магнитного поля. Добавьте элюирующий буфер для элюирования ячеек iNKT.
Внутрибрюшинно вводите нормальному DBA/1 мыши альфа-GalCer в дозе 0,1 м
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео