Выделение инвариантных естественных киллеров Т-клеток из мышиной модели

0 просмотров3:35 мин • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Начните с внутрибрюшинного введения синтетического гликолипида мыши.

Антигенпрезентирующие клетки, или APC, интернализуют гликолипид и представляют его через неклассическую молекулу MHC CD1d.

АПК мигрируют в селезенку и взаимодействуют с инвариантными естественными киллерами Т-клетками или клетками iNKT, индуцируя активацию и пролиферацию клеток iNKT.

Соберите урожай из селезенки. Механически диссоциируйте его, чтобы получить одноклеточную суспензию.

Переложите клетки в пробирку. Добавьте градиент плотности среды и центрифугуйте для разделения лимфоцитов.

Соберите лимфоциты. Добавьте гликолипидные антигены, меченные флуорофорами CD1d-тетрамеры, которые взаимодействуют с клетками iNKT.

Удалите несвязанные тетрамеры. Наложение магнитных микрошариков, которые связываются с тетрамер-связанными флуорофорами.

Удалите несвязанные шарики и загрузите суспензию элемента на магнитную колонку.

Под действием магнитного поля связанные с шариками элементы iNKT удерживаются в колонке, в то время как остальные ячейки протекают через нее.

Извлеките колонку из магнитного поля. Добавьте элюирующий буфер для элюирования ячеек iNKT.

Внутрибрюшинно вводите нормальному DBA/1 мыши альфа-GalCer в дозе 0,1 мг на килограмм массы тела. Через три дня после моделирования, после обезболивания, изолируйте селезенку мыши. Приготовьте одноклеточную суспензию, разрезав и измельчив селезенку в сите с 200 мешами. Промойте клеточную суспензию с помощью PBS. Центрифугируйте при 200 умноженных на g в течение 5 минут и выбросьте надосадочную жидкость.

Суспендируйте клетки с помощью 1 миллилитра цельной крови и раствора для разведения тканей. Добавьте 3 миллилитра среды для разделения лимфоцитов мыши, а затем центрифугируйте клетки в течение 20 минут, при 300-кратном изгне, при комнатной температуре.

Чтобы очистить клетки iNKT, ресуспендируйте от 10 до 7 клеток 100 микролитрами 4 градусов Цельсия PBS. Добавьте 10 микролитров CD1d Tetramer-PE, загруженного альфа-GalCer, и инкубируйте их при температуре 4 градуса Цельсия в течение 15 минут в темноте. Дважды промойте клетки PBS, и повторно суспендируйте их в 80 микролитрах PBS. Добавьте 20 микролитров микрогранул анти-ПЭ и инкубируйте их при температуре 4 градуса Цельсия в течение 20 минут в темноте. Дважды промойте их PBS и повторно суспензируйте клетки 500 микролитрами PBS.

Поместите сортировочную колонну в магнитное поле сортировщика MACS, и промойте 500 микролитрами PBS. Добавьте подготовленную суспензию клеток в сортировочную колонну, соберите проточную жидкость и трижды промойте буфером PBS. Снимите магнитное поле и добавьте в сортировочную колонку 1 миллилитр буфера PBS. Быстро нажмите на поршень с постоянным давлением, чтобы ввести меченые элементы в сборную трубку и получить очищенные элементы iNKT. Подсчет с помощью автоматического счетчика ячеек.

09:01

Оптимизированная метод выделения и расширение Инвариантные естественных киллеров Т-клеток из селезенки мыши

Похожие видео

0 Просмотры

09:01

Интегрировать изображений проточной цитометрии и транскриптомики, профилирование для оценки измененных Endocytic CD1d торговля

Похожие видео

0 Просмотры

08:37

Очистка и расширение мышечных инвариантных естественных Т-киллеров для исследований in vitro и in vivo

Похожие видео

0 Просмотры

09:47

Выделение CD4 + Т-клеток от мышей лимфатических узлов с помощью Miltenyi MACS очистки

Похожие видео

0 Просмотры

04:17

Выделение естественных клеток-киллеров из ткани печени для селективной экспансии

Похожие видео

0 Просмотры

06:18

Выделение инфильтрирующих опухоль иммунных клеток из головного мозга мышей

Похожие видео

0 Просмотры

07:12

Мышь наивного CD4

Похожие видео

0 Просмотры

09:09

Эффективная и высокая Метод Выход для выделения мышиных дендритных клеток подмножествах

Похожие видео

0 Просмотры

11:28

Изоляция лимфоциты от мыши небольшой кишечной иммунной системы

Похожие видео

0 Просмотры

09:02

Выделение врожденных лимфоидных клеток матки для анализа методом проточной цитометрии

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 22 августа 2026