Усиление вирусной трансдукции в естественных клетках-киллерах с помощью катионного полимера

Возьмем, к примеру, естественные киллеры, или NK-клетки. Добавьте лентивирусные векторы, состоящие из вирусных ферментов и сконструированных молекул РНК, кодирующих флуоресцентный белок.

Добавьте катионные полимеры и осадите клетки и вирусы.

Полимеры нейтрализуют отрицательные заряды как вируса, так и клетки, способствуя слиянию мембран

.

РНК обратно транскрибируется в ДНК и интегрируется в геном хозяина, обеспечивая экспрессию флуоресцентных белков.

Добавляют среду, дополненную цитокином интерлейкином-2, или ИЛ-2.

IL-2 запускает внутриклеточную сигнализацию, которая способствует выживанию и пролиферации NK-клеток, сохраняя при этом экспрессию трансгенов.

Перенесите смесь в хорошо покрытую антителами жидкость, которая связывается со специфическими иммунорецепторами на NK-клетках, провоцируя их высвобождение противовирусных цитокинов.

Количественно оцените высвобожденные цитокины для оценки влияния полимера на продукцию цитокинов.

Добавьте флуоресцентные красители для маркировки ДНК некротических клеток.

С помощью проточной цитометрии можно идентифицировать живые клетки и количественно оценить сигнал флуоресцентного белка для измерения эффективности полимер-индуцированной трансдукции