Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:57 мин. • July 8th, 2025
Начните с пробирки, содержащей транскрибируемые in vitro мРНК, которые кодируют зеленые флуоресцентные белки.
МРНК содержит модифицированные нуклеотиды, 5-метил-цитидинтрифосфат и псевдоуридин трифосфат, которые предотвращают иммунный ответ и повышают стабильность мРНК.
5'-конец мРНК дефосфорилируется, предотвращая ее распознавание рецепторами распознавания образов на макрофагах.
Добавьте к мРНК реагент для трансфекции на основе катионных липидов, способствуя инкапсуляции мРНК за счет электростатических взаимодействий и образуя комплекс.
Введите комплексы липид-мРНК в многолуночный планшет с прилипшими первичными макрофагами, полученными от мышей, и осторожно перемешайте для равномерного перемешивания.
Макрофаги интернализуют мРНК-содержащий комплекс в эндосому. Позже комплекс сливается с эндосомальной мембраной, высвобождая мРНК в цитоплазму клетки.
Поли-А хвост на 3'-конце стабилизирует мРНК, которая подвергается синтезу белка для производства зеленых флуоресцентных белков.
Под флуоресцентным микроскопом зеленая флуоресценция в макрофагах позволяет предположить успешную трансфекцию модифицированными мРНК.
Подготовьтесь к трансфекции, добавив в реакционную пробирку заранее рассчит
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео