Фотоиммунотерапия в ближнем инфракрасном диапазоне для таргетной элиминации клеток в смешанных 3D-культурах

Возьмем культуру висячих капель смешанных сфероидов, которые представляют собой гетерогенные клеточные агрегаты, состоящие из клеток-мишеней, экспрессирующих рецепторы фактора роста и флуоресцентный белок, в то время как клетки, не являющиеся мишенями, экспрессируют флуоресцентный белок другого цвета.

Замените среду конъюгатом антитело-фотоабсорбер, содержащим моноклональное антитело, специфичное для клеток-мишеней, и краситель фотоабсорбера.

Инкубируйте для облегчения связывания антител с рецепторами клеток-мишеней.

Промойте сфероиды с помощью фильтрующего материала, чтобы удалить несвязанные конъюгаты, затем переложите их в чашку со стеклянным дном со средой для светового облучения.

Подвергайте сфероиды воздействию ближнего инфракрасного света для фотоиммунотерапии, запуская фотохимическую реакцию красителя-фотопоглотителя на клетках-мишенях, вызывающую быстрое повреждение клеточных мембран и гибель клеток.

Этот процесс удаляет клетки-мишени, не повреждая клетки, не являющиеся мишенями.

Переложите сфероиды на свежую подвесную пластину. Добавьте среду и инкубируйте для роста сфероидов.

Под флуоресцентным микроскопом отсутствие флуоресценции клеток-мишеней свидетельствует об эффект