JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 2:12 мин • July 8th, 2025
Начните с самки мыши под наркозом в положении лежа на спине, несущей уротелиальные опухоли в эпителии мочевого пузыря.
Закрепите задние лапы, найдите отверстие уретры и вставьте катетер в мочевой пузырь мыши. Промойте мочевой пузырь, чтобы удалить мочу.
Введите нейтрофил-активирующий белок Helicobacter pylori, или HP-NAP — иммуномодулирующий бактериальный белок.
В опухолевом микроокружении HP-NAP взаимодействует с Toll-подобными рецепторами на нейтрофилах и инициирует сигнальный каскад, увеличивая экспрессию провоспалительных цитокинов.
Цитокины запускают дифференцировку наивных Т-лимфоцитов в Т-хелперы 1-го типа, или Th1, и цитотоксические лимотические типа 1, или Tc1, которые продуцируют интерферон-гамма.
Интерферон-гамма подавляет образование новых кровеносных сосудов, ограничивая доступность питательных веществ и кислорода для опухоли.
Кроме того, он активирует молекулы MHC, представляющие опухолевый антиген, на опухолевых клетках, облегчая взаимодействие с клетками Tc1.
Это взаимодействие приводит к высвобождению цитотоксических молекул, которые индуцируют гибель опухолевых клеток, демонстрируя противоопухолевую эффективность HP-NAP.
Не менее чем через три дня после введения клеток MB-49, после обезболивания животного, катетеризировать, как только что продемонстрировано, и с помощью 1-миллилитрового шприца с 200 до 300 микролитрами стерильного PBS смыть остаточную мочу из мочевого пузыря, отасунув всю жидкость.
Введите в мочевой пузырь 50 мкг белка, активирующего нейтрофиль Helicobacter pylori или HPNAP, на 150 микролитров PBS, оставив шприц прикрепленным к катетеру, чтобы избежать утечки. Через час аккуратно извлеките катетер из мочеиспускательного канала и поместите мышь в клетку под нагревательную лампу до тех пор, пока она не проснется.