Подавление репликации вируса гепатита В с помощью вирусных антиген-специфических Т-клеток

Возьмем, к примеру, Т-клетки с рецепторами, которые связываются с антигенами вируса гепатита В, или HBV.

Введите Т-клетки в хвостовую вену мыши.

Позвольте введенным клеткам распространиться в печени.

Чтобы имитировать вирусную инфекцию, возьмите плазмиды, несущие геном HBV.

Быстро вводите плазмиды в хвостовую вену, направляя плазмиды в печень.

Сила жидкости проникает в эндотелий сосудов и создает временные поры в клетках.

Плазмиды проникают в клетку и подвергаются синтезу РНК, производя мРНК, которая используется для производства вирусного белка.

Некоторые из этих белков действуют как вирусные антигены.

Антигенпрезентирующие молекулы переносят вирусные антигены на поверхность клетки, подвергая их воздействию Т-клеток.

Эти иммунные клетки взаимодействуют с вирусными антигенами и инициируют механизмы уничтожения инфицированных клеток, препятствуя сборке и распространению вирусных белков.

Для гидродинамической доставки плазмиды ВПЧ через хвостовую вену разведите 10 мкг плазмиды ВПЧ в 8% эквиваленте массы тела PBS. Загрузите плазмиду в один 3-миллилитровый шприц, оснащенный полудюймовой иглой 26-го калибра на каждую мышь.

Нагрейте мышей HHD под тепловой лампой в течение пяти минут, чтобы расширить хвостовые вены, и осторожно втяните мышь в пластиковый ограничитель. Найдите расширенную боковую хвостовую вену в средней трети хвоста и вставьте иглу параллельно вене, чтобы доставить весь объем плазмиды через хвостовую вену в течение трех-пяти секунд.

Для переноса адоптивных клеток из вирусных антиген-специфических CD8-положительных Т-клеток, полученных из iPSC, соберите CD8-положительные Т-клетки iPSC на 22-й день культивирования, как это было продемонстрировано, и поместите клетки в новую 10-сантиметровую чашку для культивирования клеток.

Через 30 минут в инкубаторе для клеточных культур отфильтруйте плавающие клетки через 70-микрометровый нейлоновый фильтр и подсчитайте жизнеспособные клетки. Разбавленный продается в соотношении 1,5 x^10,7 клеток на миллилитр концентрации PBS.

Введите 200 микролитров клеток отдельным мышам с HHD в возрасте от четырех до шести недель в хвостовую вену, как только что было продемонстрировано. На 14-й день после переноса клеток проведите гидродинамическую доставку плазмиды ВПЧ, как показано на рисунке.