Клеточная терапия аутоиммунного артрита на мышиной модели

Возьмем, к примеру, регуляторные Т-клетки, полученные из iPSC, или Tregs, экспрессирующие рецепторы, специфичные для овальбумина. Введите их в хвостовую вену сдержанной мыши.

Клетки достигают синовиальной оболочки, выстилающей внутреннюю поверхность капсулы коленного сустава.

Далее вводят метилированный бычий сывороточный альбумин или мБСА, эмульгированный адъювантом.

Адъюванты усиливают презентацию mBSA антигенпрезентирующим клеткам, или APC, которые обрабатывают и представляют фрагменты через молекулы MHC.

АПК мигрируют в лимфатические узлы, вызывая активацию Т-клеток. Активированные Т-клетки мигрируют в коленный сустав.

Вводите только mBSA и mBSA с овальбумином в левый и правый коленные суставы соответственно.

В левом колене APC представляют фрагменты mBSA активированным Т-клеткам, вызывая провоспалительное высвобождение цитокинов и приводя к повреждению тканей и отеку суставов, называемому артритом.

В правом колене Tregs взаимодействуют с овальбумин-презентирующими APC и высвобождают противовоспалительные цитокины, уменьшая повреждение тканей и отек суставов, тем самым улучшая артрит.

Начните с отделения представляющих интерес клеточных культур с помощью трипсина и повторного суспендирования каждого типа клеток в 10 миллилитрах свежей среды. Поместите каждую клеточную культуру в новую 10-сантиметровую чашку и дайте питающим клеткам прилипнуть в инкубаторе для клеточных культур. Через 30 минут соберите плавающие ИПСК и пропустите культуры через отдельные 70-микронные клеточные фильтры, чтобы удалить клеточные кластеры для подсчета.

Повторно суспендируйте каждую культуру в концентрации 1,5 x 10⁷ клеток на миллилитр в холодном PBS, при необходимости снова фильтруя. Затем поместите 4-6-недельных самок мышей C57BL6 по одной в ограничитель для мелких животных и переведите 200 микролитров одного типа клеток на мышь в хвостовую вену каждого животного.

Через 10 дней после переноса клеток с помощью шприца объемом 1 миллилитр введите мышам 100 микрограммов метилированной эмульгированной БСА, эмульгированной в полном адъюванте Фрейнда у основания хвоста каждого подопытного животного.

Через

17 дней после переноса клеток вызвать артрит путем внутрисуставной инъекции 20 мкг метилированного БСА в 10 микролитрах PBS в левый коленный сустав и 20 микрограммов метилированного BSA, а также 100 микрограммов цельного овальбумина в 10 микролитрах PBS в правый коленный сустав каждого животного, подвергшегося адоптетическому переносу.

Через семь дней после индуцирования артрита снова измерьте коленные суставы для расчета процентного увеличения диаметра колена и хирургическим путем иссеките коленную чашечку. Зафиксируйте стыки в формалине. Затем, после декальцинации при ЭДТА, заделывают колени в парафин, и получают 4-микронные срезы для гистохимического окрашивания и анализа.