Метод ex vivo для получения опухолеспецифичных химерных антигенных рецепторов Т-клеток

Принимайте ретровирусные векторы, смешанные с первичными клетками селезенки.

Векторы содержат трансгенную РНК, кодирующую химерный антигенный рецептор или CAR, который нацелен на опухолеспецифический антиген.

Цитокин интерлейкин-2 в среде избирательно способствует пролиферации Т-клеток, в то время как другие клетки в конечном итоге умирают.

Переложите смесь на микропланшет, покрытый фрагментами рекомбинантного фибронектина.

Центрифуга для облегчения связывания фрагментов фибронектина с векторами и Т-клетками, опосредуя взаимодействие вируса с клеткой-хозяином, и инкубации.

После слияния оболочки векторов с клеточной мембраной вирусные ферменты обратное транскрибирование высвобожденной РНК в ДНК и встраивание ее в геном хозяина.

Трансдуцированные Т-клетки экспрессируют поверхностно связанные CAR, состоящие из вариабельного фрагмента внеклеточного антитела, нацеленного на опухолеспецифический антиген и внутриклеточные сигнальные области для ответа на антиген.

Повторно суспендируйте клетки перед тем, как перенести их в трубку.

Центрифуга отбрасывает надосадочную жидкость, содержащую неинтернализованные вирусы, и повторно суспендирует клетки в буфере для последующих анализов.

На следую