Доставка эффекторных Т-лимфоцитов мышам с опухолями головного мозга человека

Возьмем, к примеру, мышь с иммунодефицитом под наркозом, несущую приживленную опухоль мозга человека.

Снимите шерсть с места операции и продезинфицируйте. Нанесите мазь на глаза, чтобы предотвратить пересыхание роговицы.

Расположите мышь на стереотаксической рамке с грелкой для поддержания температуры тела.

Сделайте разрез на волосистой части головы, обнажив череп.

Найдите брегму, ориентир на черепе, и определите место для инъекции, чтобы расположить над ней микрошприц.

Микрошприц содержит суспензию опухолеспецифичных эффекторных Т-лимфоцитов от здоровых доноров человека.

Создайте отверстие в месте инъекции на черепе, избегая травмы головного мозга. Введите иглу в мозг и медленно высвободите эффекторные Т-лимфоциты в месте опухоли.

Частично извлеките иглу и удерживайте ее на месте, не допуская утечки введенных клеток, прежде чем полностью извлечь иглу.

Закройте разрез и дайте мыши восстановиться.

Убедитесь, что животное адекватно обезболито, ущипнув палец ноги, а затем удалите шерсть с места операции между двумя ушами и вплоть до носа. Медленно суспендируйте клетки, чтобы предотвратить слипание клеток, и загружайте суспензию в шприц с большой осторожностью, чтобы избежать присутствия пузырьков.

Затем поместите шприц в адаптированный шприцевой насос. Продезинфицируйте место операции тампоном, смоченным в 5% растворе повидон-йода, и заложите в глаза мыши смазывающую офтальмологическую мазь, чтобы предотвратить высыхание роговицы. Затем расположите мышь под наркозом на стереотаксической рамке на теплом изотермическом блоке. Правильно расположите нос и зубы мыши над зубчатым стержнем. Плотно затяните ушные планки в ушах мыши, чтобы обездвижить голову. Будьте осторожны, чтобы не повредить барабанные перепонки.

Ухудшите дыхание и убедитесь, что голова хорошо обездвижена. Сделайте сагиттальный разрез кожи по средней линии стерильными ножницами вдоль верхней части черепа, чтобы обнажить череп. Определите пересечение сагиттальной и корональной структур, которые будут служить ориентирами для стереотаксической локализации, и поместите шприц выше этой точки.

Переместите шприц по заранее заданным координатам на 2 миллиметра в сторону и на 0,5 миллиметра внутрь брегмы. С помощью микросверла сделайте небольшое отверстие в черепе стерильным сверлом. Будьте осторожны и оставайтесь поверхностными, чтобы избежать травмы головного мозга.

Осторожно введите шприц в просверленное отверстие. Медленно переместите иглу вперед на 3 миллиметра вниз по твердой мозговой оболочке, а затем назад на 0,5 миллиметра назад на конечную глубину 2,5 миллиметра перед инъекцией.

Вводите клеточную инъекцию со скоростью 2 или 3 микролитра в минуту и наблюдайте за мышами на протяжении всего времени инъекции. После завершения инъекции извлеките иглу всего на 1 миллиметр и удерживайте шприц на месте еще минуту, прежде чем медленно полностью извлечь шприц, чтобы предотвратить утечку из места инфузии. Осторожно извлеките животное из стереотаксической рамки.

Закройте кожу соответствующим хирургическим швом и нанесите 2% гель с лидокаином непосредственно на рану. Перенесите мышь под наркозом в соответствующую клетку над грелкой, установленной на 37 градусов Цельсия, чтобы поддерживать соответствующую температуру тела мыши до полного восстановления после анестезии.