Модель интерпозиции аорты мыши для изучения аллоиммун-индуцированного сосудистого отторжения

Подготовьте мышь-донора под наркозом и поместите ее в лежачее положение. Сделайте разрез по средней линии, чтобы обнажить брюшную полость.

Выведите кишечник наружу, чтобы обнаружить инфраренальную брюшную аорту или ИУК под почечными артериями, несущими насыщенную кислородом кровь.

Отделите ИУК от прилегающей нижней полой вены, которая несет кровь, лишенную кислорода.

Перевяжите небольшие ветви рядом с ИУК и зажмите ИУК для затруднения кровотока.

Иссеките отрезок соответствующей длины и поместите его в солевой раствор.

Повторите процедуру с мышью-реципиентом с другим генетическим фоном.

Имплантируйте донорскую ИУК внутри реципиента, соответствуя его анатомической ориентации.

Выполняйте анастомозы «конец в конец», пришивая концы донорского трансплантата к концам реципиента.

Отпустите зажимы и проверьте нормальный кровоток без протекания. Вернуть кишечник в брюшную полость. Далее зашиваем место разреза.

Теперь модель готова для изучения иммунных реакций против трансплантированного трансплантата IAA.

Начните с того, что поместите мышь-донора в положение лежа на чистой, тонкой плексигласовой доске, завернутой в стерильную простыню, под операционный микроскоп с 8-30-кратным увеличением.

После подтверждения адекватной хирургической анестезии путем защемления пальцев ног с помощью стерильных ножниц сделайте один разрез по средней линии от лобка до мечевидного отростка. Далее с помощью небольшого ретрактора вскройте брюшные стенки, обнажив брюшную полость. Затем с помощью стерильных аппликаторов с ватным наконечником аккуратно втяните кишечник вверх слева от животного. Накройте ткань марлей, смоченной в физрастворе, и переместите репродуктивные органы вниз, чтобы расположить инфраренальную аорту и нижнюю полую вену или НПВ.

Теперь с помощью медицинских щипцов No 5 отделите аорту от IVC в левой почечной артерии рядом с бифуркацией. Затем используйте полиамидные монофиламентные швы 10-0, чтобы перевязать небольшие ветви возле аорты. Когда донорская аорта и НПВ были разделены, насытите сосуд физиологическим раствором. Накройте открытую полость увлажненной марлей и отложите донора в стерильную зону.

Теперь поместите мышь-реципиент под микроскоп и отделите аорту реципиента от НПВ, как показано выше. Затем поместите два 4-миллиметровых микрососудистых зажима проксимальнее и дистальнее интересующего сегмента на расстоянии примерно 5 миллиметров друг от друга. Далее, с помощью микроножниц Vannas-Tübingen, сделайте одну горизонтальную аортотомию, и резецируйте не более 0,5 миллиметра брюшной аорты для размещения донорского аортального трансплантата.

Верните донора в микроскоп и пересекте сегмент трансплантата размером от 3 до 4 миллиметров, как показано выше. Тогда. С помощью иглы 5/8 калибра 25 калибра промойте иссеченную аорту гепаринизированным физиологическим раствором, следя за тем, чтобы кончик иглы не соприкасался с сосудом, и поместите сосуд в емкость с гепаринизированным физиологическим раствором на льду.

В течение 30 минут после иссечения поместите донорский аортальный трансплантат в ортотопическое положение у реципиента, сопоставляя анатомическую ориентацию соответствующего трансплантата с ориентацией реципиента. Затем аккуратно возьмитесь за внешнюю оболочку сосуда и с помощью щипцов No 5 слегка переверните ее. Теперь с помощью щипцов проведите иглу, прикрепленную к полиамидному монофиламентному шву 10-0, через всю толщину стенки сосуда, чтобы закрепить донорский аортальный трансплантат к резецированному сосуду реципиента.

Для наложения непрерывных швов позиционируйте швы в положении «9 часов» как на верхнем, так и на нижнем концах трансплантата. Затем, начиная с верхнего конца трансплантата с 3 часов, анастомозируйте резецированные концы двумя ходящими швами и закрепите шов к оставшемуся шву. Затем переверните трансплантат и продолжайте наложение шва на дорсальную часть сосуда, встречая исходный шов. Закрепите шов, не оказывая большого давления на сосуд, и повторите наложение швов для нижнего анастомоза.

После завершения анастомоза освободите дистальный микрососудистый зажим, чтобы обеспечить ретроградный ток крови по сосуду. Если кровотечения не наблюдается, освободите проксимальный зажим. Если кроветворных препятствий не наблюдается, с помощью щипцов аккуратно обхватите один конец швов и слегка отогните сосуд, чтобы осмотреть заднюю стенку сосуда. Не должно наблюдаться сморщивания. Если наблюдается сильный пульс как в донорском, так и в реципиентном сосудах, используйте аппликаторы с ватным наконечником, чтобы вернуть кишечник в брюшную полость.

Наконец, используйте иглодержатель и щипцы Грефе, чтобы закрыть брюшную стенку полипропиленовыми швами 5-0 и непрерывным швом. С помощью подкожного умывальника закройте слой кожи теми же швами. Можно наблюдать за двигательной функцией задних конечностей для оценки успешности операции.